Biología Molecular

 Técnicas de PCR en el diagnóstico del virus de la Hepatitis B (VHB)

Tema: Técnica de PCR en tiempo real (qPCR) en el diagnóstico del virus de la Hepatitis B (VHB).

Objetivo: Detectar y amplificar secuencias específicas del ADN viral del VHB, permitiendo de esta manera la identificación del virus VHB en la muestra.

Muestra: Puede ser obtenida de suero, plasma u otras muestras biológicas que contengan el material genético del paciente infectado con VHB.

Tipo de ácido nucleico: ADN (Ácido desoxirribonucleico), dado que el VHB es un virus ADN.

Extracción: Se lo realiza mediante técnicas de extracción, como el fenol-cloroformo.

Genes a analizar: Regiones específicas del genoma del VHB, como el gen S (codifica proteínas de superficie del virus) o el gen X.

Tamaño en pares de bases: Su tamaño aproximado es de 3.2 kilobases (kb).

Tipo de PCR: Técnica de PCR en tiempo real (qPCR).

Pasos

Desnaturalización: Se realiza a temperaturas elevadas (95-98°C) durante 30 segundos, en este paso se rompen las uniones de hidrógeno entre las hebras de ADN.

Hibridación: Se reduce la temperatura entre 50-65°C, para que los cebadores de VHB se unan a las secuencias de las hebras de ADN, dura 40 segundos.

Elongación: Se realiza a una temperatura de 72°C, permite que la enzima ADN polimerasa sintetice nuevas hebras de ADN complementarias a partir de los cebadores unidos, dura de 30 a 60 segundos.

Electroforesis: Es opcional, el producto de la PCR se puede analizar mediante electroforesis en gel para separar y visualizar las hebras amplificadas; en la PCR en tiempo real, la acumulación de fluorescencia se monitoriza en cada ciclo, para tener una cuantificación en tiempo real.

Número de ciclos: Se suelen realizar 40 ciclos en total para detectar el VHB mediante la PCR en tiempo real (qPCR).

Referencias bibliográficas:

1. Hijar G, Carrillo C, Padilla C, Cabezas C, Suárez M, Romero G, et al. Estandarización de la PCR para el diagnóstico del virus de la Hepatitis B en el Perú. Rev. perú. med. exp. salud pública [internet]. [citado el 17 de diciembre de 2023]; 15 (1-2): 30-33. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-46341998000100006